交联葡聚糖凝胶

医学用品

SephadexG交联葡聚糖的商品名为Sephadex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200为每克干胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150、和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分布范围。

简介

商品属性

Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。

交联葡聚糖凝胶是将纯化后的线性葡聚糖（a-1，b-吡喃型葡聚糖）与环氧氯丙烷反应，再导入丙三醇侧链而在葡聚糖链间形成交联链，再将所得的凝胶制成直径不同的球形即可。所得三维实体在水中能溶胀而不能溶解。交联度越高，凝胶孔径越小。

用途

Sephadex G-10葡聚糖凝胶 G-10 分离范围＜700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离；

Sephadex G-15葡聚糖凝胶 G-15 分离范围＜1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离；

Sephadex G-25葡聚糖凝胶 G-25 分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离；

SephadexG-50葡聚糖凝胶 G-50 分离范围 1500-30000 适用于多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定；

Sephadex G-75葡聚糖凝胶 G-75 分离范围 3000-80000 适用于蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定；

Sephadex G-100葡聚糖凝胶 G-100 分离范围 4000-150000 适用于蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定；

Sephadex G-150葡聚糖凝胶 G-150 分离范围 5000-300000 适用于蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定；

Sephadex G-200葡聚糖凝胶 G-200 分离范围 5000-600000 适用于蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定。

制备过程

葡聚糖凝胶微珠表面形态存在粒子凝集和表面粗糙两种不良情况。粒子凝集的原因是分散剂聚醋酸乙烯酯(PVAc)在碱性条件下水解导致亲水性增强，以及交联反应的中间产物具有絮凝作用。另外，交联后粒子粘度增大也可导致凝集。葡聚糖微珠表面粗糙是由于后处理时PVAc的微小附着物没有从微珠表面完全除去而造成的。作者采取低温分散、交联，分步加入交联剂和调节搅拌速度等控制手段，有效地解决了上述问题。

使用方法

1. 乙醇浸泡：

在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干;

2.无盐水浸泡：

室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀，然后；

3. 盐酸浸泡：

在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗至中性；

4. 将溶胀好的凝胶脱气后（真空抽滤或超声波）根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；

5. 上样前平衡层析柱至少3-5 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值）；

6. 凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20% 的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm 以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1 即可；

7. 洗脱方法：

可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化；

8. 在位清洗（CIP）

凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

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