凝集效价

糖蛋白能够与红细胞上的糖蛋白结合

凝集素是一种糖蛋白能够与红细胞上的糖蛋白结合，使红细胞凝集，经过倍比稀释法，在血凝板观察记录得到凝集效价。

检测

凝集素效价的检测步骤：

（1）倍比稀释：向“V”型血凝板个孔中加入20μLPBS 缓冲液，然后分别吸取样品纯化试液20μL 加入到“V”型血凝板的第一孔，混合后取出20μL 加入到第二孔，混合后亦取出20μL加入到第三孔，以此类推作倍比稀释。微微摇动血凝板使其混匀。每孔加入20μL2%血球悬液，血球悬液加毕后继续摇动1min ，血凝板在室温置放2h。用肉眼观察凝集反应情况，记录凝集程度。（n=5）

（2）将凝集程度分为5个等级，从低到高分别以0、1、2、3、4 表示。

4：红细胞完全凝集，呈一层薄膜片状，均匀地分布在整个孔中，且边缘不整齐。

3：红细胞大部分凝集，但不成膜状，周边有较窄的透明带，且有未凝集的红细胞沉淀于孔底成红色小圆点状。

2：红细胞部分凝集，周边有较宽的透明带，且有未凝集的红细胞沉淀于孔底成红色圆点状，且相当于空白对照组的50%。

1：红细胞大部分不凝集，有可见凝集颗粒，未凝集的红细胞沉淀于孔底成红色圆形状。

0：红细胞完全不凝集，全部沉淀于孔底成大的圆形状，与空白对照组完全相同。

（3）血凝效价判断：以能使50%红细胞凝集的血凝素的最高稀释倍数作为血凝效价，即上述表示为“2”的凝集程度所对应的稀释倍数。

（4）样品凝集素含量计算公式:

C=S0 *f*V/(f0 *W)*100%

式中S0 为标准样品的浓度，f为待测样品的凝集效价（如2的多少次方），V为待测样品溶液的体积（ml），f0 为标准样品的凝集效价，W为待测样品质量。

可能影响因素

植物凝集素(简称PHA)不仅对动物血中的红血球有一定的凝集作用,而且对血液中的淋巴细胞分裂有一定的刺激作用。而PHA对各种动物血的凝集效价,则是淋巴细胞体外培养中决定PHA适宜加人量的一个重要依据。在培养鹿茸血及静脉血之前,做了PHA对这些物种的血液的凝集效价测定。采用了从菜豆、雪山豆和商喻中提取的三种PHA。结果发现,不同来源的PHA对同一种鹿血产生凝集作用所需的浓度略有不同;同一种PHA对鹿科不同物种的血的凝集效价也有不同,对起源越晚的物种,效价越低,这一趋势十分明显;在用三种不同来源的PHA试验时,这一趋势非常一致。并且在其他动物中,也反映出PHA对进化程度较高的动物,凝集效价较低的趋势。

PHA是一类蛋白质,它们能够使红血球发生凝集,是因为它们能与细胞表面的某一些含酪的受体相结合。不同的PHA对于不同动物的红血球凝集效价有不同,过去已有人发现,但是,我们的试验却表明,PHA对不同动物血的凝集效价,和动物起源早晚与进化程度有关。可以推测,各种动物红血球细胞膜化学结构分子水平的差异,很可能是影响PHA凝集效价的决定性因素。因此,今后如能对这一现象的生物化学实质进行深人的研究,可对动物的分子进化学提供一些新的事实。

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