Maxam-Gilbert法

DNA序列分析最常用的方法

Maxam-Gilbert的化学断裂法是DNA序列分析最常用的方法之一，它既适用于双链DNA，也适用于单链DNA。它的基本原理是利用几个具有碱基专一性的化学切断反应将单个末端被32P标记的DNA分子进行部分切断，产生几组从标记末端到与碱基专一性反应相应的那种碱基在DNA中每个位点的长短不同的片段，这几组片段在凝胶电泳中并排着按链长被分开，对凝胶进行放射自显影后就可以得到代表每个碱基位置的带谱，从这个带谱可以直接读出从标记末端向另一个末端方向的碱基序列。

Maxam-Gilbert法

Maxam-Gilbert法研究进展

核酸的一级结构的阐明，对于了解基因的结构、调控和表达有着重要的意义。sanger和Coulson建立的加减法和Maxam和Gilbert建立的化学断裂法使DNA序列分析技术有了革命性的突破。以后sanger等人又发展了双脱氧核苷酸末端终止法，M13单链噬菌体克隆技术的建立使利用该法测定DNa序列变得更加方便、迅速；Maxam-Gilbert法也有了新的改进。类似的技术已应用于RNA的序列分析。结合限制性内切酶和重组DNA分子克隆技术的应用，核酸的序列分析已成为当前分子生物学中发展最快的领域。核酸序列分析技术已成为许多实验室的常规技术，大量核酸一级结构的资料正在迅速积累，人们已着手建立核酸序列库、利用电子计算机来处理这些资料。

Maxam-Gilbert操作方法

由于凝胶电泳分辨率的限制，必须将DNA分子用限制性内切酶切割成数百个核苷酸长的片段，从这些片段的序列组建成整个DNA分子的序列。为此必须先建立DNA的限制性内切酶图谱。

在进行酶图分析时，通常先测定切点较少的酶的位点，然后再测定切点较多的酶的位点。内切酶切点出现的频率一般可根据内切酶识别序列的核苷酸长短来估计，即大约每4n个碱基有一个内切酶切点，n为该种内切酶识别序列的核苷酸数目，如识别6核苷酸序列的内切酶的切点出现频率大约是每4，096(46)个碱基有一个。

酶图分析的简便方法是将DNA分子用限制性内切酶切断，用琼脂糖凝胶或聚丙烯酞胺凝胶电泳，将产生的DNA片段分开，根据这些片段的数目和大小，可以推定该种内切酶的切点数目及位置。

对于切点较多的内切酶位点，可将这种内切酶酶解DNA后产生的片段，与该种内切酶和已知切点位置的切点较少的内切酶混合酶解后产生的片段比较，从被已知切点位置的内切酶切断而消失了的片段和新产生的片段的大小来推定该种内切酶的位点。在建立了初步的限制性内切酶图谱、开始序列分析后，随着序列结果的积累，还会发现更多的在进一步的序列分析中有用的内切酶切点。

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