宇佐美曲霉

以野生植物为原料酿酒的糖化用菌

宇佐美曲霉（Aspergillus usamil），以野生植物为原料酿酒的糖化用菌。

识别特征

CNIFFI选育(2171经紫外外诱变)。能以野生植物为原料酿酒的糖化用菌。培养基47,最适培养温度28-30℃。

生物现状

保护及保存现状：

人工保存

主要用途和价值：

酿酒

开发利用现状：用于各种工业酶制剂发酵生产

保护建议：

不详

遗传多样性：

不详

宇佐美曲霉特征

营养体：粗长杆状，两端钝圆，革兰氏染色反应不定，产生β-羟基丁酸盐（PHB）颗粒。菌体大小为（1.0~1.2）×（2.5~7.0）μm，菌体周围有厚荚膜。

芽孢：壁厚，椭圆形，中生或近端生，芽孢囊不膨大或微膨大。菌落圆形，无色，隆起，胶质粘稠，透明或半透明，边缘整齐。好氧或兼性厌氧生长，水解淀粉，接触酶反应阳性，氧化酶和卵磷脂酶反应阴性，在无氮培养基上生长良好。

宇佐美曲霉功效

宇佐美曲霉具有解磷、解钾的功能；

具有活化土壤中硅、钙、镁等元素的作用；

具有提高铁、锰、铜、锌、钼、硼供应的功效；

提高或延长肥效，减少化肥用量；

提高作物抗逆性，预防或减轻病害。

宇佐美曲霉相关研究进展

朱天地将来自宇佐美曲霉(Aspergillususamii)E001的乙酰木聚糖酯酶基因在毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中实现异源表达,并对其相关酶学性质进行了研究。以宇佐美曲霉(A.usamii)E001总RNA为模板,利用软件Oligo7.0设计引物Auaxe-F和Auaxe-R,进行RT-PCR扩增出编码乙酰木聚糖酯酶的cDNA基因(Auaxe),构建重组克隆载体pUCm-T-Auaxe进行保种测序,结果显示该基因序列长828bp,编码275个氨基酸。将Auaxe序列与表达载体pPIC9KM连接,构建重组表达质粒pPIC9KM-Auaxe,SalI线性化后电击转入毕赤酵母基因组中,遗传霉素(G418)筛选获得阳性转化重组酵母GS115/Auaxe,经1%甲醇诱导表达72h,以对硝基苯酚醋酸酯为底物,50℃、pH6.0条件下通过分光光度法测得重组乙酰木聚糖酯酶(reAuAxe)的酶活性为35.6U/mL。此外,为了提高乙酰木聚糖酯酶蛋白的表达量,对GS115/Auaxe的诱导表达条件进行了优化,reAuAxe的酶性活最高达到98.5U/mL,是优化前的2.11倍。采用(NH4)2SO4沉淀、DEAE-52阴离子交换层析和透析的方法对重组乙酰木聚糖酯酶粗酶液进行分离纯化。结果表明,其纯化倍数为1.7,回收率为63.1%,SDS-PAGE电泳结果显示纯化后的乙酰木聚糖酯酶在34.0kDa处有一条清晰条带,测其比酶活为390.5U/mg。该酶最适作用pH为6.0,在pH4.5~7.0之间性质较稳定;最适作用温度为50℃,在45℃及以下性质稳定;所测金属离子及EDTA对该酶活性影响不明显;以对硝基苯酚醋酸酯为底物,在50℃、pH6.0的条件下,该酶的Km和Vmax值分别为0.72mmol/L和555.6U/mg。以小麦麸皮为研究对象,探究重组乙酰木聚糖酯酶分别与重组木聚糖酶(reAuXyn11A和reAuXyn10A)、重组纤维素酶(reAuCel12A)及复合酶之间的协同作用。结果表明,当reAuAxe与reAuXyn11A的酶量比为5:1时协同效果较好,还原糖生成量比reAuXyn11A单独作用增加了46%;当reAuAxe与reAuXyn10A的酶量比为5:1时协同效果较好,还原糖生成量增加了16%;同样reAuAxe与reAuCel12A以5:1添加时,还原糖生成量比reAuCel12A单独作用增加了28.4%;reAuAxe与复合酶以5:1添加时,还原糖生成量提高了33.6%。

杨琥研究宇佐美曲霉酸性蛋白酶(PepA)的基因合成宇佐美曲霉酸性蛋白酶PepA基因由1182个碱基组成并编码394个氨基酸(其中有20个氨基酸编码信号肽序列,50个氨基酸编码前导肽,324个氨基酸编码成熟酶)。编码区在不改变氨基酸序列的前提下,根据毕赤酵母密码子的偏爱性进行优化并合成pepA。PepA表达载体的构建和表达PepA在毕赤酵母载体pHBM905A中成功地实现表达。重组酵母菌体命名为PEPASA。

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