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抑制消减杂交

建立在抑制PCR 与消运用杂交二级动力学原理，减杂交技术相结合的基础上更简单快速的分离差异基因的方法

抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH) 是建立在抑制PCR 与消运用杂交二级动力学原理，减杂交技术相结合的基础上的更简单快速的分离差异基因的方法。即丰度高的单链DNA 在退火时产生同源杂交的速度快于丰度低的单链DNA，使原来在丰度上有差别的单链DNA 相对含量达到基本一致，利用链内退火优于链间退火的特点，使非目的序列片段两端反向重复序列在退火时产生类似发卡的互补结构，无法作为模板与引物配对从而选择性地抑制了非目的基因片段的扩增。

该法既利用了消减杂交技术的消减富集，又利用了抑制PCR技术进行高效动力学富集。先将T与D方CDNA用限制酶切割为小片段，将T方平均分为2份，分别连接不同的接头，然后与过量的D方CDNA进行不充分杂交。浓度高的单链分子迅速复性，而浓度低的单链分子仍以单链形式存在。然后混合两份杂交样品，同时加入新的变性D 方CDNA 进行第二次扣除杂交，杂交完全后补平末端，加入合适引物接头(接头1与接头2 引物)进行PCR 扩增。当DNA 两条链含相同接头时，其PCR 扩增受抑制，而含不
同接头的双链DNA 分子才可进行指数扩增，其产物即为目的片段。此技术避免了消减杂交过程中分离单双链DNA 的步骤，可成千倍地扩增目的片段，能分离出T 方上调表达的基因，与DDRT-PCR 相比，具有假阳性少、重复性强的优点。它的最大不足就是需要较多的起始材料，更多地依赖于PCR 技术，且不能同时进行数个材料之间或不同处理材料之间的比较。
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