液氮研磨

分子生物学术语

液氮研磨应用于有关脱氧核糖核酸(DNA)分离，应用于有关脱氧核糖核酸(DNA)分离。

原理

分子生物学是当前生命科学领域的前沿学科,其理论与技术已渗透到各学科领域,而分子生物学实验在生命科学研究中显得相当重要。在实际工作中,许多实验材料比如动物身上的肌肉组织、结缔组织、骨组织、毛发组织等,植物的根、茎、叶、种子等均需磨碎,随后才能对其成分、基因与蛋白质及结构和功能进行研究。

液氮研磨在分子生物学实验中应用广泛,特别是有关核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)的分离。液氮的温度为一196℃,它既能使各种组织成分不易被破坏或降解,又能使组织变硬,脆性增加易于磨碎。正是由于液氮的温度极低,操作时要特别小心。液氮研磨，一是为了终止细胞内外一切生物反应，比如提取RNA时，防止RNA酶的降解反应等；还有一个原因，就是在液氮中的细胞完全冻硬了，研磨可以达到很好的破胞效果，将细胞磨成粉，使里边的物质释放出来。

操作流程

液氮容器的准备

液氮一般保存于液氮罐中。实验前先准备一个保温桶,将适量液氮转移至保温桶中,同时还要准备一个不锈钢或塑料汤勺,汤勺的柄不够长时要想办法加长,以免冻伤手。

组织的处理及用量

任何组织在获得后如不立即使用,要尽快保存在低温环境中(一196℃液氮中速冻,一70℃保存)。使用时,植物组织应当先用自来水清洗外表的泥沙,用单蒸水冲洗两遍,用75%乙醇浸洗约30秒,再用灭菌双蒸水冲洗两遍,用无菌滤纸吸干,然后根据需要取适当部位的组织。动物组织不必清洗,但要尽量剔除周边的组织及血块。组织的取量要比实际需要量大1一2倍,因为研磨时部分组织会粘在研钵和研棒上,会致部分组织样本丢失

研钵的固定

我们在实验时发现,研钵在加液氮后温度很低,外表会形成许多冰晶,用力研磨组织时易打滑,研钵内的组织液氮混合物很容易溅出,造成组织丢失,也容易冻伤手。如果在研钵下垫些纱布或滤纸,虽不易滑动,但由于缓冲作用,研磨时不受力,不足取。后来我们作了如下改进:一是做个木支架,即选一块厚约两寸的木板,在上面挖个半球形圆洞(大小根据研钵大小而定),木板两端留一定长度以备手握之用,使用时将研钵卡在半球形洞中,既稳当又不会冻伤手;二是备一条干净的毛巾或纱布(干的),折成长条形,将研钵包围起来,两端合并后用手抓住,这个方法简单实用,但要特别小心,以免冻伤。

研磨方法

空钵先用液氮预冷,再将研棒的上端用纱布包裹(用力时手不会痛),组织最好切成薄片,研磨时不易溅出,也更容易磨碎,研棒最好顶着手心,这样便于用力。研磨过程中要避免液氮干涸,研磨至细粉即可。待液氮刚蒸发完时,用一个小药勺取出所需用量进行下一步实验,或者将组织粉末装人容器内,保存于一70℃的温度下,以备下一步实验用。使用得当的液氮研磨组织法,将为下一步实验成功奠定了基础。值得一提的是,操作中所有接触的器皿及耗材须清洗干净并消毒。如果研磨组织用于提取RNA时,使用的器皿及耗材必须采用焦碳酸二乙醋(DEPC)灭活RNase并进行高压消毒处理。

注意事项

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