点样

液滴加到薄层板上的过程称之为点样

将待分离、鉴定的样品溶液的液滴加到薄层板上的过程称之为点样。点样是造成定量误差的主要来源。样品溶液的制备过程中，不同的点样设备、点样体积，以及点样方式等均是造成误差的因素。上述条件的选择决定于分析目的、样品溶液的浓度及被检测农药的灵敏度。

1. 点样设备

点样设备分为手持型和机械型。最常用的点样设备是定量毛细管或微量注射器，点样时，直接手持点样器接触薄层板面，利用毛细作用或手移滴加样品溶液到薄层板表面，完成点样工作。近年来，国内外相继开发了机械点样的设备，比较先进的全自动点样设备结合了现代电子及机械技术，实现吸样、点样、清洗、点样方式的安排、点样速度的控制等一体化操作，使定量分析结果准确。

2. 点样方式

（一）点状点样

如果仅仅为了定性，用内径约0.5mm管口平整的毛细管或微量注射器将样品溶液点在距薄层底边约2cm处，点样直径不超过5mm，点间距约为1-1.5cm即可。为进行定量，借毛细作用吸样的定容管有两种，一是容积为0.5、1、2、3、4及5μL的定量毛细管(Microcaps)，另一种是100及200nl的铂铱合金定量毛细管(Nanopipette)；注射器式的可变体积的点样器有50-230nl的毫微点样器(Nano-Applicator)及0.5-2.3μl的微量点样器(Micro-Applicator)，用于需要调节体积及没有毛细作用的键合相薄层的点样。

毛细管式的微量点样器装在手动的Nanomat型点样装置的磁性点样头上，点样头装在弹簧上。按下此点样头，毛细管借恒定的压力接触薄层表面。点间距离由带准确的#44 间隔的E字形缺刻装置控制，CAMAG Nanomat Ⅲ型手动点样器，适用于普通或高效薄层板，点样体积精确，样品原点小，原点间隔定位准确；注射器式的毫微点样器及微量点样器由测微尺控制，也可与Nanomat型点样装置配合，以使点样位置精确。

电动的Nanomat Ⅲ型点样装置完全适用于上述各种点样器的配套使用，并且还可以自动控制点样次数，点样器在薄居上的停留时间，以及点样器接触薄层的速度。还可避免手持毛细管点样时的用力不匀，由于靠机械控制接触板面，压力恒定。此外，还有可以用于环形展开及向心展开的薄层点样装置。

（二）带状点样

当样品溶液体积大、浓度稀时，采用CAMAG Linoamt Ⅳ型自动点样设备进行带状点样。定量分析的点样范围为1-99μl，制备型分离点样范围为5-490μL，作定量标准曲线时，可由同一标准溶液，自动点上不同体积的标准液，故快速简便，利用内装的微处理器编序操作，简单易行。使用时样品溶液吸在微量注射器中，点样器不接触薄层，而是用氮气将注射器针尖的溶液吹落在薄层上，薄层板在针头下定速移动点成0-199mm的窄带。带状点样展开后的斑点不仅分辨率明显高于点状点样，而且精密准确，为定量分析提供最佳条件。

（三）自动点样

Automatic TLC Sampler Ⅲ型（ATS Ⅲ）全自动点样装置结合了现代最先进的电子及机械技术，能进行点状或带状点样，采用先进计算机编程控制，灵活多用，点样量为10nl-50μl，可随意设定点样规范，可应用于单向、双向、环形或向心色谱展开，高度自动化的点样使定量分析结果准确。点样参数可与Scanner Ⅱ扫描仪的CATS扫描分析软件连用，令定量分析工作达到高度自动化。

（四）接触点样

当样品溶液粘度较大或点样体积要超过100μl时，用毛细管点样就有困难，Fenimore设计的接触点样法适用于这类样品的点样，美国制造的Clarke Contact Spotter就是这种接触点样器，见图7-3-2。在带有抽气孔的凹形块的上方覆盖一片涂有疏水性物质的聚氟化物薄膜（a），当减压抽气时薄膜凹陷（b），此时将样品溶液点在凹槽处（c），然后用氮气吹去大部分溶剂（d），再将浓缩后的样品液滴与高效薄层板的吸附剂层接触（e），此时样品就定量地转移到薄层上。

3. 注意事项

（一）不同溶剂对样品的洗脱能力不同，因此在点样的同时，样品在原点开始呈环形展开，如果样品在溶剂中的溶解度很大，原点将变成空心环，Kaiser称这种现象为“点样环形色谱效应”。这种效应对随后的线形展开造成不良影响，因此配制样品溶液时应选用对组分溶解度相对较小的溶剂；溶剂的粘度不宜过高，以便于点样，溶剂的沸点要适中，沸点过低由于挥发会改变样品溶液浓度导致较大误差，沸点过高，样品溶液的溶剂会在原点残留，导致改变展开剂的选择性，特别是样品溶液的溶剂与展开剂的极性相差较大时更为明显，最常用的溶剂为甲醇及乙醇，有时也用丙酮。点样后必须将溶剂全部除去后再进行展开，但要避免高温加热，以免改变待测成分的性质。点样方式、点样量及点样设备的选择决定于分析的目的、样品溶液的浓度及被测物质的检出灵敏度。

（二）点样体积经典薄层一般为1-5μl，高效薄层为100-500nl，样品溶液浓度一般在0.01%-1.00%范围内，点样过多会造成原点“超载”，展开剂产生“绕行”现象使斑点拖尾或重叠，使扫描峰形不对称或不能基线分离，并由于超载得到非线性的校正曲线，严重影响定量结果，降低准确度。经典薄层的原点直径最大不得超过5mm，一般3mm较为合适，高效薄层原点直径约为1-2mm，尽可能避免多次点样，原点直径过大会降低分辨率及分离度。经典薄层起始线距底边约1.5cm，高效薄层为1cm，展距前者为10-15cm，后者为5-7cm，对于难分离的化合物用多元展开剂展开时，注意原点与展开剂的距离每次要保持一致，否则由于色谱分离最初行为的差异而导致分离失败。点与点的间距经典薄层为1-2cm，高效薄层为0.5cm，用具自动换行功能的薄层扫描仪时，斑点之间的距离必须十分精确，才能正确地扫描每行的色斑，得到好的测定结果。

（三）在点样前，应将薄层板在日光及紫外光下检查板面有无损坏或污染，选择合格的薄层板后决定用点状点样还是用带状点样。为此，瑞士CAMAG公司生产了系列点样设备以供选用，这些设备只适用于硬板。下面是常用的点样方式及设备。

全国各地天气预报查询

上海市

云南省

云南省

云南省

云南省