玻片凝集试验

定性试验方法

玻片凝集试验是定性试验方法，具有简便、快速的特点，一般用来鉴定菌种或分型，也用于人类ABO血型的鉴定。一般用已知抗体作为诊断血清、与受检颗粒抗原如菌液或红细胞悬液各加1滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现颗粒凝集的为阳性反应。

简介

凝集反应是一种血清学反应。颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等）与相应抗体结合，在有电解质存在的条件下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类。玻片法是一种定性试验方法。可用已知抗体来检测未知抗原。若鉴定新分离的菌种时，可取已知抗体滴加在玻片上，将待检菌液一滴与其混匀。

原理

玻片凝集反应是在载玻片上将细菌等颗粒性抗原与其相应抗体混合，如两者对应则可发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集块，即为阳性反应；混合后均匀浑浊，无凝集块出现者为阴性反应。本法可应用于用已知抗体(免疫血清)检测未知抗原，为定性试验。主要用于细菌鉴定、分型和人类ABO血型鉴定。本实验以人类ABO血型鉴定试验为例。

人类ABO血型抗原有A和B两种抗原。A型者的红细胞膜上含有A抗原，B型者的红细胞膜上含有B抗原，AB型者的红细胞膜上含有A、B两种抗原，O型者的红细胞膜上不含有A、B两种抗原。分别将抗A、抗B抗体与受检者红细胞混合，抗A和(或)抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，呈阳性反应，无凝集现象则为阴性。

类型

直接凝集反应颗粒状抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体直接结合所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法。数分种后，如出现肉眼可见的凝集现象，为阳性反应。该法简便快速，除鉴定菌种外，尚可用于菌种分型、测定人类红细胞的ABO血型等。试管法是一种定量试验的经典方法。可用已知抗原来检测受检血清中有无某抗体及抗体的含量。用来协助临床诊断或供流行病学调查研究。操作时，将待检血清用生理盐水连续成倍稀释，然后加入等量抗原，最高稀释度仍有凝集现象者，为血清的效价，也称滴度，以表示血清中抗体的相对含量。诊断伤寒、副伤寒病的肥达氏反应（Widaltest）、布氏病的瑞特氏反应（Wright test）均属定量凝集反应。

间接凝集反应将可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的颗粒状载体的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用。在有电介质存在的适宜条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应。用做载体的微球可用天然的微粒性物质，如人（O型）和动物（绵羊、家兔等）的红细胞、活性炭颗粒或硅酸铝颗粒等；也可用人工合成或天然高分子材料制成，如聚苯乙烯胶乳微球等。由于载体颗粒增大了可溶性抗原的反应面积，当颗粒上的抗原与微量抗体结合后，就足以出现肉眼可见的反应，敏感性比直接凝集反应高得多。

试验方法

1．用酒精棉球消毒无名指指端皮肤，待乙醇干后用无菌采血针刺破表皮，用毛细吸管取血1一2滴，放入含1ml生理盐水的小试管中，混匀，即成待检红细胞悬液(浓度约为5%)。取血后。应立即用无菌干棉球压迫针眼止血。

2．取干净载玻片一张，用记号笔分为两格，并注明A、B字样。

3．用吸管吸取抗A血清、抗B血清各一滴分别滴于A、B格内。

4．另用吸管取待测红细胞悬液，于A格和B格内各加一滴。然后轻轻晃动载玻片使抗血清与红细胞充分混匀。

5．将载玻片放置于实验台上静置数分钟后，在白色背景下观察凝集情况。

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